A.I. Polinova ، D.R. زاگیروا ، L.Yu. کوکاوا ، آی. آی. Busko ، I.V. لوانتسویچ ، S.N. الانسکی
در سالهای اخیر ، وضعیت گیاه پزشکی ذخایر سیب زمینی و دانه به طور محسوسی در بلاروس رو به وخامت گذاشته است. نقش انواع خاصی از ارگانیسم های مضر و نسبت آنها در آگروفیتوسنوز تغییر کرده است. مضر بودن بسیاری از بیماری های نه تنها گسترده (بیماری اواخر بیماری ، جایگزینی ، انواع دلمه ها ، باکتریوز ، پوسیدگی خشک فوزاریوم) ، بلکه موارد جدیدی که به اندازه کافی مورد مطالعه قرار نگرفته اند ، مانند پوسیدگی آبکی زخم ، افزایش یافته است (شکل 1). این بیماری که در هند ، آسیای میانه و سایر کشورهای جنوبی اتفاق می افتد ، در مناطق گومل ، برست ، گرودنو و مینسک بلاروس مشاهده شد. مانند سایر اومیستهای ساکن خاک ، P. ultimum در شرایط رطوبت بیش از حد - در مناطق با زهکشی ناچیز ، هنگام باران های طولانی مدت ، آسیب زیادی می رساند (تیلور و همکاران ، 2008).
در بلاروس ، شیوع این بیماری سالها با افزایش درجه حرارت در فصل رشد مشاهده شد: در برخی از دسته های سیب زمینی ، 8-10 of غده ها تحت تأثیر قرار گرفتند. زخم آبکی غده می تواند صدمات قابل توجهی ایجاد کند ، که به دلیل کمبود انواع مقاوم ایجاد می شود ، اقدامات محافظتی و توسعه سریع بیماری در صورت آسیب به غده ایجاد می شود (Zhuromskaya ، 2003 ؛ Ivanyuk و همکاران ، 2005). این بیماری فقط غده ها را درگیر می کند. در روسیه ، پوسیدگی آبکی زخم هنوز قابل توجه نیست.
در این کار ، ما 4 گونه از عوامل ایجاد کننده پوسیدگی آبکی زخم جدا شده از غده سیب زمینی تحت تأثیر انواع وکتار بلاروسی ، Skarb و هیبریدهای تولید مثل در انبارهای مرکز علمی و عملی آکادمی علوم ملی بلاروس برای سیب زمینی و باغبانی (منطقه مینسک) را بررسی کردیم. اهداف این مطالعه تعیین گونه های جدا شده از جدا شده ، حدت آنها در رابطه با غده های سیب زمینی ، ارزیابی رشد در دمای مختلف محیط و مقاومت به متالاکسیل بود.
میسلیوم جدایه ها در محیط نخود مایع رشد داده شد (180 گرم نخود سبز منجمد به مدت 10 دقیقه در 1 لیتر آب مقطر جوشانده می شود و پس از آن به مدت 30 دقیقه در اتمسفر 1 اتوكلاو می شوند). DNA از هر سویه جدا شد. برای جداسازی DNA ، میسلیوم منجمد در نیتروژن مایع خرد شد ، در بافر CTAB لیز شد و سپس با کلروفرم پروتئین زد. DNA در آب دیونیزه در دمای 20- درجه سانتیگراد ذخیره شد. تجزیه و تحلیل توالی های نوکلئوتیدی مناطق ژنوم خاص گونه ها (مناطق ژن های ریبوزومی هسته ای 18S و 5,8S ، و همچنین فاصله بین ژنتیکی رونویسی داخلی ITS1) ، که با استفاده از آغازگرهای ITS1 و ITS2 تکثیر شده است (وایت ، 1990) ، نشان داد که سویه های مورد مطالعه متعلق به گونه های حداکثر Pythium Trow هستند. (مترادف Globisporangium ultimum (Trow) Uzuhashi ، Tojo & Kakish).
تمام سویه های مورد مطالعه برش غده های سیب زمینی گالا را که در محفظه های مرطوب قرار گرفته اند تحت تأثیر قرار می دهند. لکه های تیره روی آنها ایجاد شد ، بعداً به زخم های مرطوب نفوذ پذیر تبدیل می شوند (شکل 2). عفونت با قرار دادن میسلیوم P. ultimum در مرکز برش غده انجام شد.
دیسکهای غده تلقیح شده در دمای 22+ درجه سانتیگراد انکوباتور شدند. حداکثر سرعت رشد منطقه آسیب دیده در 2 روز اول مشخص شد ، سپس منطقه زخم عملا بدون تغییر باقی ماند.
این الگو برای همه سویه های مورد مطالعه معتبر بود.
سرعت رشد سویه ها در محیط آگار جو دو سر در دمای 5 ، 15 ، 24 و 34 درجه سانتی گراد برآورد شد (شکل 3). رشد در همه دما مشاهده شد. حداکثر سرعت رشد در دمای 24 درجه سانتی گراد مشاهده شد (فنجان 86 میلی متر در 2 روز کاملاً بزرگ شد). در دمای 15 و 34 درجه سانتیگراد ، سرعت رشد به طور قابل توجهی پایین تر بود (به ترتیب در 4 و 3 روز فنجان رشد کرد).
در دمای 15 ، 24 و 34 درجه سانتیگراد ، سرعت رشد همه سویه های مورد مطالعه تفاوتی نداشت. در دمای 5 درجه سانتیگراد ، سویه P1 خیلی سریعتر از بقیه رشد کرد (20 میلی متر در روز 4) ، P4 - تا حدودی کندتر (10 میلی متر در روز 4) ، P2 و P3 عملا رشد نکردند.
همچنین لازم به ذکر است که در دمای 24 درجه سانتیگراد رشد بلافاصله پس از کاشت بر روی یک ظرف آغاز شد ، در دمای 15 و 34 درجه سانتیگراد یک روز تاخیر در شروع رشد فعال وجود دارد ، و در 1 درجه سانتیگراد - تا 5 روز.
متالاکسیل (و ایزومر مفنوکسام آن) به عنوان موثرترین داروها برای کنترل اومیستهای خاک شناخته می شوند. متالاکسیل قادر است به غده ها نفوذ کند و (حتی در غلظت های بسیار کم) محافظت طولانی مدت از آنها را ایجاد کند (Taylor et al.، 2008، Bruin et al.، 1982). با این حال ، اثر متالاکسیل پس از ظهور سویه های مقاوم در جمعیت ، به شدت کاهش می یابد. سویه های بسیار مقاوم در مناطق مختلف ایالات متحده یافت شده است (تیلور و همکاران ، 2002). هیچ اطلاعاتی در مورد مقاومت سویه های بلاروسی P. ultimum به متالاکسیل وجود ندارد و بنابراین تصمیم گرفته شد مقاومت آنها در برابر دارو در این کار آزمایش شود.
مطالعه حساسیت به قارچ کش متالاکسیل در محیط آگار جو دو سر با افزودن قارچ کش در غلظت های مختلف انجام شد (Pobedinskaya ، Elansky ، 2014).
سویه های مورد مطالعه در مقاومت به متالاکسیل تفاوت هایی داشتند (جدول 1). بنابراین ، در غلظت قارچ کش 1 میلی گرم در لیتر ، رشد سویه P4 کاملاً متوقف شد و بقیه سویه ها بسیار کند شد. سویه های P1 و P2 در محیطی با غلظت متالاکسیل 10 میلی گرم در لیتر بسیار آهسته رشد کردند. غلظت موثر محاسبه شده EC50 (غلظت قارچ کش که سرعت رشد سویه را 2 برابر نسبت به شاهد کاهش می دهد) برای همه سویه ها کمتر از 1 میلی گرم در لیتر بود. بنابراین ، تمام سویه های بررسی شده به metalaxyl حساس بودند. نشان داده شده است که در جلوگیری از رشد P. ultimum بسیار موثر است.
به گفته بروین و همکاران (1982) پس از تیمار گیاهان در حین پوشش گیاهی با متالاکسیل با دوز 0,5/0,055 کیلوگرم در هکتار ، تجمع قارچ کش در غده ها 0,022/0,034 میکروگرم بر گرم در پریدرم ، XNUMX/XNUMX میکروگرم بر گرم در لایه قشر مغز و XNUMX/XNUMX میکروگرم در گرم در قسمت مرکزی غده بود. طبق اطلاعات ما ، این غلظت متالاکسیل برای مقابله با بیماری کافی نیست ، اما می تواند روند رشد آن را کند کند.
هنگام رشد در محیط جو دوسر ، همه سویه ها در گیاهان تک کشت تشکیل اوسپور (شکل 4) ، که برای P. ultimum معمول است. به هم پیوستن سویه ها به صورت جفتی علائم قابل مشاهده ناسازگاری رویشی را نشان نداد - فنجان ها به طور مساوی با میسلیوم پوشانده شدند.
داده های به دست آمده نشان می دهد که P. ultimum یک فیتوپاتوژن است که قادر به رشد سریع در محدوده دمایی گسترده ، از جمله در دمای ذخیره سازی 5 درجه سانتیگراد است. این ماده برای بافت غده های سیب زمینی ویروس آور است و ماهیچه هایی تشکیل می دهد که قادر به بقای طولانی مدت هستند. بنابراین ، این گونه یک فیتوپاتوژن خطرناک است که می تواند تهدیدی برای کشاورزی باشد و نیاز به مطالعه بیشتری دارد.
این تحقیق با حمایت بنیاد علمی روسیه (پروژه N 14-50-00029) انجام شده است.
جدول 1. حساسیت سویه های P. ultimum به متالاکسیل
نژاد | غلظت متالاکسیل ، میلی گرم در لیتر | ||
0 (کنترل) | 1 | 10 | |
P1 | 63 | 6 | 0 |
P2 | 65 | 5 | 0 |
P3 | 59 | 0 | 0 |
P4 | 61 | 0 | 0 |
P1 | 105 | 10 | 3 |
P2 | 110 | 10 | 3 |
P3 | 95 | 0 | 0 |
P4 | 98 | 0 | 0 |
تقریباً داده های متوسط برای 3 اندازه گیری داده شده است.
مقاله در ژورنال "حفاظت از سیب زمینی" (شماره 1 ، 2017) منتشر شد